引物怎么自己设计呢 如何进行引物设计？

如何进行引物设计？

如果这对通用引物没有信号，就意味着这两个位置有SNP，导致没有扩增。可以参考几种方法。

1：你可能知道这种细菌的种类和属，所以去NCBI找到相关种类的16S序列，做序列比对，设计简并引物，扩增全长，然后测序。

2：你根本不了解物种。你可以在网上找到更多的入门知识。最好放大v3v4区或V4区。在放大了其中一些之后，你可以对它们进行排序和比较。一般来说，你可以确认属，然后按照1的方法。

3:如果部分序列可以通过方法2扩增，但全长引物未能扩增，则将获得的部分序列用作race。

4:以上所有操作均失败。第二代的DNA被提取和测序，基因组被直接测量（如果你认为成本太高，你可以减少数据量进行比较）。

怎样选择合适的引物？

在PubMed网站上找到相应基因的mRNA序列，复制到引物设计软件（如primer premier），软件会设计不同的正、负链引物，选择合适的一个（得分较高），复制到PubMed网站，下拉框中有PubMed blast，粘贴软件设计的前、后引物，通过搜索结果判断引物是否正确、特异。

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