放射性自显影曝光时间公式 dna印迹技术的操作程序？

dna印迹技术的操作程序？Southdna探针片段是什么？DNA探针是用同位素、生物素等标记的特定DN段。，可以大到寄生虫基因组DNA，小到20个碱基。当DNA探针和待检测的未标记的单链DNA(或RN

dna印迹技术的操作程序？

South

dna探针片段是什么？

DNA探针是用同位素、生物素等标记的特定DN段。，可以大到寄生虫基因组DNA，小到20个碱基。

当DNA探针和待检测的未标记的单链DNA(或RNA)根据碱基序列互补结合时，两个单链DNA通过氢键连接，形成标记的DNA-DNA(或标记的DNA-RNA)的双链杂交分子。

未配对的探针经洗涤和稀释后，用检测系统(放射自显影或酶检测等)检测杂交结果。).

由于DNA分子碱基互补的准确性，单链DNA探针只与样品中变性的DNA单链杂交，这就决定了探针的特异性。用放射性同位素(如32P)或生物素标记探针，同时使杂交试验高度灵敏。

用什么标记追踪蛋白质分子合成，加工过程？

同位素示踪技术一般用于示踪活细胞中蛋白质合成和分泌的过程。基本步骤如下:

①在细胞培养液中加入放射性同位素标记的氨基酸(3H-亮氨酸)，这些与相应的未标记氨基酸具有相同化学性质的标记分子在短时间内进入细胞内(称为脉冲标记)；

(2)除去培养液并洗涤细胞，然后在含有未标记氨基酸的培养基中培养细胞。已进入细胞的标记氨基酸会被蛋白质合成系统利用为原料，混合成新合成的蛋白质；

③每隔一定时间取出一定数量的细胞，用电镜放射自显影检测不同时间标记的特异性蛋白的位置。通过比较不同时间取样的细胞的电镜照片，可以了解细胞内蛋白质合成和分泌的动态过程。

dna印迹分析的正确操作步骤是？

操作步骤:

1.用6×SSC的固定化DNA润湿膜。

2.将膜的DNA面朝上放入杂交管中，ATP溶液量约为1 ml/cm2，在68℃的杂交炉中滚动3小时。

3.预杂交结束时，将DNA探针在100℃变性10分钟，并置于冰中。

四将杂交管中的APH溶液倒出，换成等体积的预热过的APH溶液(68℃)，加入变性探针，在68℃滚动杂交过夜。

5.倒出APH溶液，加入同体积的2×SSC/0.1%SDS，室温下滚动孵育10分钟。5分钟后更换膜清洗液。

6.用0.2×SSC/0.1%SDS替换上述膜清洗液，室温下滚动孵育10 min后更换膜清洗液。

7.如有必要，用0.2×SSC/0.1%SDS在42℃下冲洗膜两次，每次15分钟，松紧适度。

8.如有必要，在68℃，0.1×SSC/0.1%SDS下，高紧密度清洗膜15分钟两次。

9.倒掉最后一次洗片液，室温下用2×SSC冲洗胶片，吸干多余的液体，然后用塑料薄膜包裹，放射自显影。